Chimie

Séparation des protéines


La séparation des protéines par chromatographie d'affinité

Cette technique utilise la haute affinité de nombreuses protéines pour certains groupes chimiques. Dans le cas des protéines, il s'agit souvent de partenaires d'interaction tels que enzyme-substrat, anticorps-antigène, enzyme-coenzyme ou, en général, protéine et ligand. Par exemple, la protéine végétale Concanavaline A peut être purifiée en plaçant un extrait brut sur une colonne avec des résidus de glucose liés de manière covalente. La concanavaline est liée au glucose en raison de sa haute affinité, tandis que la plupart des autres protéines de l'extrait brut ne se lient pas au glucose et s'élisent dans le flux.

En général, ce procédé se déroule de telle manière qu'un substrat ou un ligand de la protéine souhaitée est lié de manière covalente au matériau de la colonne. Parfois, le ligand est lié à la matrice de la colonne via une sorte de bras (espaceur) afin que la protéine et les ligands puissent interagir efficacement et qu'aucun encombrement stérique ne se produise. L'extrait brut est ensuite passé sur la colonne dans un tampon de fonctionnement approprié, moyennant quoi la protéine d'intérêt est liée tandis que d'autres protéines sont éluées dans cette étape. Les molécules de protéines sélectivement liées à la colonne peuvent ensuite être à nouveau éluées de la colonne en ajoutant un excès de substrat ou de ligand ou en abaissant le pH, etc.

Ce type de chromatographie est très efficace et donne dans la plupart des cas des protéines très propres. Dans la technologie de l'ADN recombinant, les protéines produites dans des systèmes hétérologues sont souvent isolées par chromatographie d'affinité. La protéine à purifier est, par exemple, fusionnée avec un domaine de liaison au glutathion et la protéine de fusion est isolée via une matrice de colonne à laquelle le glutathion est lié. D'autres systèmes (d'autres marqueurs d'affinité) sont basés sur des domaines de liaison au sucre ou de petits peptides tels que le marqueur streptavidine, qui se lie à la streptavidine. Un cas particulier de chromatographie d'affinité est la chromatographie sur chélate métallique.

L'immunoprécipitation

L'immunoprécipitation est un exemple typique de chromatographie d'affinité, dans laquelle la liaison sélective d'un anticorps à un antigène est utilisée.


Vidéo: proteínas (Janvier 2022).